農桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析
簡要描述：
農桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析GV3101菌株的背景為C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）
產品時間：2024-08-12
打印當前頁GV3101(pJIC SA_Rep) Chemically Competent Cell
農桿菌化學感受態(tài)細胞
產品標簽：
GV3101(pJIC SA_Rep)菌株；農桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉基因研究；
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產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
GV3101(pJIC SA_Rep) Chemically Competent Cell 農桿菌化學感受態(tài)細胞 | MF2471-1000UL | 10×100μl | 288 |
MF2471-5000UL | 50×100μl | 1228 |
產品描述：
GV3101菌株的背景為C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。pMP90（pTiC58DT-DNA）型Ti質粒攜帶篩選標簽Gent，賦予GV3101菌株慶大mei素抗性。在GV3101菌株中轉入help質粒：pJIC SA_Rep，即得到GV3101(pJIC SA_Rep)菌株，可協(xié)助
pgR106，pgR107，pGreen，pGs2系列質粒在農桿菌內復制，同時賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。另外，來源于番茄叢矮病毒的p19蛋白，能抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應，提高異源基因轉錄子的穩(wěn)定性，進而改善異源蛋白的表達。本菌株適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。
我司（懋康生物）提供的GV3101(pJIC SA_Rep)化學感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pJIC SA_Rep -tetR)，經pGs2質粒（卡那mei素抗性）檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。
產品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2471-1000UL | MF24-5000UL | ||
MF2471-A | GV3101(pJIC SA_Rep)Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2471-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，一年有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） 整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。
3） 加入質粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導致轉化效率急劇下降。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
4） 為確保最高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 轉化高濃度的質粒可相應減少最終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質粒用量。
7） 利fu平濃度應≤25μg/ml，過高濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
8） 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質粒丟失，但鏈mei素不利于農桿菌的轉基因操作，一般培養(yǎng)農桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素，因Ti質粒丟失的概率極低（基本可以忽略）。
9） GV3101(pJIC SA_Rep)感受態(tài)細胞雖具有四環(huán)素抗性，但在轉入目標質粒涂板篩選陽性克隆時，只需加入目標質粒抗性的抗生素，不用加四環(huán)素。
10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于10μl）質粒DNA（注意：轉化效率較高，第一次使用前建議做預實驗確定適宜的質粒量），用手撥da管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。
4) 6,000rpm離心1min，留取100μl左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素（不含四環(huán)素抗性）的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意】：當平板只含50μg/ml卡那mei素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時，需28℃培養(yǎng)60h；若使用的平板含50μg/ml利fu平，需在28℃培養(yǎng)72-90h。
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MF3732-2UG | pGreenII 0800-Luc Plant Expression Vector植物表達載體 | 2μg |
MF3733-2UG | pGreenII 62-SK Plant Expression Vector植物表達載體 | 2μg |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0020-25G | Tetracycline Hydrochloride, USP Grade鹽suan四環(huán)素 | 25g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫suan鏈mei素 | 25g |
MX7401-500G | Agar, Gel Strength＞1200 g/cm2瓊脂粉（植物組培級） | 500g |
MS0006-30ML | Plant Preservative Mixture (PPM)植物組培抗菌劑 | 30ml |
附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調整pH至7.0 | 調整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan鎂MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調整pH至7.0 | 調整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表3常見農桿菌對抗生素敏感性總表
農桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。
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